選擇合適的流式抗體及流式抗體搭配熒光素的原則

如何選擇流式抗體:www.biomart.cn/runwell/index.htm

*、選擇流式抗體要看清楚抗的是你的目標(biāo)蛋白質(zhì)，目標(biāo)蛋白的物種不要搞錯(cuò)了，有些抗體對(duì)好幾個(gè)物種的目標(biāo)蛋白有反應(yīng)，重要的是對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有沒(méi)有影響。
第二、抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什么。以備不時(shí)之需，還是選擇你有匹配二抗。如果抗體還能夠做熒光染色啊，western blot啊用途多了更好。
第三、選擇流式抗體還要看熒光的顏色的選擇：一是你的流式儀一定要能讀，二是跟你需要counterstain的其他流式抗體錯(cuò)開(kāi)頻率。
第四、抗體的球蛋白亞型。因?yàn)橐鶕?jù)這個(gè)選擇isotype對(duì)照用抗體。每個(gè)抗體分子攜帶的熒光分子數(shù)量也要一樣才行。是一個(gè)isotype你的好幾個(gè)抗體都能用，就省了事了。
第五、到底能測(cè)試多少樣品。有些產(chǎn)品介紹沒(méi)說(shuō)清楚，可以根據(jù)推薦的濃度計(jì)算一下。一是這樣才看出價(jià)格高低，二是根據(jù)自己需要選擇大支還是小支.買(mǎi)多了過(guò)期也是浪費(fèi)。
另外，選擇流式抗體時(shí)還可以看制作抗體所用的抗原是什么，有的是腫瘤組織提取液，有的是重組蛋白，有的是肽鏈片斷。選用哪個(gè)跟你的實(shí)驗(yàn)用途有關(guān)。有些蛋白質(zhì)有很多亞型，也要注意是否測(cè)試過(guò)跟那些亞型起反應(yīng)。

流式抗體搭配流式熒光素主要有2個(gè)原則：www.95528igw.cn

*，每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。
第二，各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配，因此需要注意：
1、流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說(shuō)明，Calibur的FL1通道選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC ，或者選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488。Calibur的FL3通道盡管能檢測(cè)PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個(gè)熒光素，但是我們搭配的時(shí)候只能選擇其中1個(gè)。
2、各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配：如果客戶(hù)的流式細(xì)胞儀能做4個(gè)通道，在第1個(gè)原則之下，那么每個(gè)通道隨便選出1個(gè)熒光素就可以組合成4個(gè)顏色。以2跟激光的Calibur為例，Calibur各個(gè)熒光素之間可以搭配出16種組合。比如常用的搭配是F I T C（ F L 1 ）＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 這個(gè)搭配組合可以更改成Alex Fluro（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro（FL4），或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC（FL4）等等。總之，在第1原則之下，我們可以隨意搭配和組合各個(gè)熒光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的話，上流式以后，容易導(dǎo)致補(bǔ)償過(guò)度。