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R&D systems公司 ELISA 酶聯吸附免疫法(四)點擊次數:1896 更新時間:2015-01-09

R&D systems公司 ELISA 酶聯吸附免疫法Q&A

問:R&D SystemsQuantikine試劑盒是否可用于組織勻漿(或其它未經檢驗的)樣本?

答:很遺憾,R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對Quantikine系列的試劑盒做效果驗證。如果要決定試劑盒是否可用于未經檢定的樣本,實驗者先做一個 “摻入和回收預試驗"。簡單來說,實驗者將樣本分為兩份:一份中摻入一定量的試劑標準,然后做一稀釋系列(一般稀釋到1:16),再將摻入過的一份同未摻 入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率(%):測試值(pg /毫升)/ 期待值(pg /毫升)x 100% = % 回收率。一般來說,回收率在80-120%可認為是可接受的。但是,可接受范圍應由每一實驗室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細的“摻入和回收"的實驗步驟,可向我們的技術服務部索取。我們也可進一步查閱文獻看一看是否有其他試驗人 員用我們的產品做過不同的樣本,或不同的屬種。


問:加入稀釋劑是否會將樣本進一步稀釋?

答:因為稀釋劑是加入到所有的孔中,標準和被測樣本都被同樣稀釋,所以樣本的濃度可從標準曲線讀出,而不需作稀釋調整。


問:我是否可將標準曲線的兩端延伸?

答:在任何情況下,我們都不支持超出確定范圍的實驗結果。在我們確定的測試范圍,我們保證實驗結果的可重復性。


問:為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度?

答:靈敏度是統計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關的zui低點,因而是可定量的。


問:Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換?

答:如果試劑盒(RD1-, RD5-, RD6-)中的稀釋劑有相同的組件號和批量號,它們可以互換。R&D Systems做“整個試劑盒的質量控制",就是說,我們不支持不同批號之間的替代。在任何情況下,微孔板和共軛物都不可互換。


問:Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換?

答:如果組件號相同,洗液在相同類型的試劑盒之間(普通試劑盒之間,或高靈敏度試劑盒之間)是可以互換的。但是,普通Quantikine試劑 盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒,在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸,會干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅動 的信號擴增。


問:在某些實驗中為什么必須使用聚丙烯(polypropylene)的試管做標準稀釋?

答:有些細胞分子會粘到玻璃或聚苯乙烯(polystyrene),但不粘聚丙烯。


問:在Quantkine試劑盒中沒有足夠的RD5校正物來稀釋我的細胞上清液,我該怎么辦?

答:你可用細胞培養液來做起始的稀釋,直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來稀釋。

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